Зачем необходимы лабораторные исследования при бактериальных инфекциях?

Для установления или подтверждения диагноза бактериальной инфекции кожи в лаборатории выполняется комплекс специализированных тестов. Несмотря на то, что тщательный сбор анамнеза и клинический осмотр имеют решающее значение, лабораторные данные помогают клиницисту поставить точный этиологический диагноз.

Культуральное исследование (бактериологический посев) с определением чувствительности выделенной культуры к антибиотикам (антибиотикограмма) считается «золотым стандартом» лабораторной диагностики.

Забор биоматериала кожи для бактериологического исследования

Образцы кожи могут быть получены следующими способами:

  • Взятие мазка сухим стерильным тампоном (тупфером) с подозрительного участка кожи — например, со дна эрозий при буллезных элементах, с поверхности сухих очагов поражения или из пустул.
  • Взятие мазка увлажненным тампоном со слизистых оболочек (например, полости рта).
  • Аспирация содержимого/гноя из очага поражения с помощью иглы и шприца (данный метод обеспечивает более высокую высеваемость микроорганизмов по сравнению с мазком).
  • Биопсия кожи: забор небольшого фрагмента ткани кожи под местной анестезией.

Мазок с кожи для бактериологического исследования

Что представляет собой бактериологический посев?

Культивирование (выращивание) бактерий чаще всего осуществляется путем нанесения биоматериала с тампона на чашки с кровяным агаром (на основе бараньей крови) с последующей инкубацией в различных заданных условиях. Рост тех или иных микроорганизмов зависит от состава питательной среды, температуры инкубации и парциального давления кислорода.

  • Облигатные аэробы способны расти исключительно в присутствии кислорода.
  • Облигатные анаэробы совершенно не способны расти в присутствии кислорода.

Культура бактерий на чашке с агаром

Посев образца с кожи предплечья

Посев образца с подушечек пальцев

Что такое определение чувствительности к антибиотикам?

Тест на чувствительность к антибиотикам (антибиотикограмма) определяет, какие антибактериальные препараты подавляют рост выделенной культуры бактерий. Эти сведения позволяют подобрать наиболее эффективный препарат для лечения конкретного инфекционного процесса. Исследование чувствительности проводится со следующими целями:

  • Оценка эффективности конкретных антибиотиков против выявленного патогена;
  • Выявление устойчивости (резистентности) бактерий к выбранным препаратам;
  • Изучение и мониторинг профилей бактериальной антибиотикорезистентности.

Что такое окрашивание по Граму?

Окрашивание по Граму — это метод дифференциальной окраски микроорганизмов с последующей световой микроскопией, позволяющий разделить бактерии на грамположительные и грамотрицательные. Метод может применяться непосредственно к нативному клиническому материалу, однако чаще всего окрашивают колонии бактерий, предварительно выращенные на питательном агаре и перенесенные на предметное стекло.

  • Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый (синий) цвет за счет удержания генцианвиолета в толстой клеточной стенке.
  • Грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный или розовый цвет, обесцвечиваясь спиртом и воспринимая контрастный краситель (например, сафранин или фуксин).

Окраска по Граму также позволяет оценить морфологию и пространственное расположение микробных клеток:

  • Кокки имеют сферическую/округлую форму;
  • Бациллы (палочки) имеют удлиненную форму;
  • Одни бактерии формируют скопления (гроздья), другие располагаются цепочками или парами.

Окрашивание по Граму коринебактерий, выделенных из культуры кожи предплечья*

*Обратите внимание на палисадное/параллельное расположение клеток в виде «китайских иероглифов».

Какие еще тесты проводятся с бактериальными культурами?

Коагулазный тест (плазмокоагулазная проба)

Коагулаза — это фермент, продуцируемый некоторыми бактериями, который переводит фибриноген в фибрин, что визуально определяется как свертывание плазмы крови. Данный тест позволяет дифференцировать коагулазоположительный золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus) от коагулазоотрицательных стафилококков (КНС).

Каталазный тест

Каталаза — фермент, расщепляющий пероксид водорода на воду и молекулярный кислород. Бактериальную культуру вносят в пробирку или каплю с раствором перекиси водорода. Образование пузырьков газа (кислорода) свидетельствует о положительной реакции. Каталазный тест позволяет дифференцировать каталазоположительные стафилококки и микрококки от каталазоотрицательных стрептококков.

Какие анализы крови проводятся при бактериальных инфекциях?

Для гематологических анализов требуется забор венозной крови. При подозрении на бактериальную инфекцию назначаются:

  • Клинический (общий) анализ крови — при бактериальном процессе обычно наблюдается лейкоцитоз с нейтрофильным сдвигом влево;
  • C-реактивный белок (СРБ) — показатель острого воспаления; при тяжелых бактериальных инфекциях его концентрация нередко превышает 50 мг/л;
  • Прокальцитонин — высокочувствительный биомаркер системного ответа и генерализованного бактериального сепсиса;
  • Серологические исследования — определение титра специфических антител в парных сыворотках с интервалом 10–14 дней для оценки иммунного ответа;
  • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR) и другие трепонемные тесты — при подозрении на сифилис;
  • Посев крови на стерильность (гемокультура) — выполняется при фебрильной лихорадке (> 38 °C) для исключения бактериемии.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Метод ПЦР основан на выделении и многократном копировании (амплификации) специфических фрагментов бактериальной ДНК в образцах кожи, крови или других тканей. Полученные последовательности ДНК сравнивают с известными геномами микроорганизмов, что обеспечивает точную идентификацию вида. ПЦР незаменима для верификации труднокультивируемых или медленнорастущих микроорганизмов, таких как анаэробы и микобактерии (возбудители туберкулеза кожи и атипичных микобактериозов), которые не растут на стандартных средах.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

ИФА позволяет выявлять специфические антигены бактерий во время инфекционного процесса либо антитела к ним. Обнаружение антител подтверждает факт иммунологического контакта с микроорганизмом в анамнезе, однако не всегда указывает на наличие текущей активной инфекции.

В дерматологии ИФА применяется относительно редко, преимущественно для диагностики следующих заболеваний:

Литература

  • Aly, R. Microbial Infections of Skin and Nails. Chapter 98. Medical Microbiology. 4th Edition. University of Texas Medical Branch at Galveston. 1996.
  • Lazarus JJ, et al. ELISA-based measurement of antibody responses and PCR-based detection profiles can distinguish between active infection and early clearance of Borrelia burgdorferi. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 138069. PubMed
  • Medscape. Bacterial wound culture. Lemuel R Non, MD.

Связанные темы на DermNet

Дополнительные ресурсы

Книги по дерматологии