Введение

Образцы кожи, волос и ногтевых пластин забирают для микроскопического и культурального (микологического) исследования с целью подтверждения или исключения диагноза грибковой инфекции (микоза).

Осмотр очагов поражения в длинноволновом ультрафиолетовом диапазоне (лампа Вуда) помогает выявить некоторые формы микозов волосистой части головы (микроспория / трихофития волосистой части головы), так как инфицированные волосы флуоресцируют характерным ярко-зеленым свечением.

Забор биоматериала для микологического исследования

Образцы для микроскопии и посева на грибы транспортируют в лабораторию в стерильном контейнере или конверте из плотной темной бумаги. В зависимости от локализации процесса материалом служат:

  • Соскоб эпидермальных чешуек — забор предпочтительно проводить по периферическому краю (активному валику) очага после предварительной обработки кожи спиртом;
  • Образцы рогового слоя, полученные методом стриппинга («липкой ленты») с фиксацией на предметном стекле;
  • Волосы, извлеченные вместе с луковицами (эпилированные);
  • Соскобы-брашинги или соскобы щеткой с шелушащихся зон волосистой части головы;
  • Фрагменты ногтевых пластин (срез свободного края) и подногтевой гиперкератотический детрит;
  • Биоптат кожи (биопсия кожи);
  • Мазок-соскоб со слизистых оболочек (полости рта, влагалища), помещенный в специальную транспортную среду.

При наличии пустул также рекомендуется взять отделяемое на бактериологический посев для исключения вторичной бактериальной инфекции.

Прямая микроскопия соскобов кожи и ногтевых пластин

Полученный материал исследуют микроскопически с применением одного или нескольких методов:

  • Препарат с гидроксидом калия (КОН-тест), в том числе с добавлением чернил или калькофлуора белого;
  • Люминесцентная (флуоресцентная) микроскопия;
  • Нативный неокрашенный препарат;
  • Окрашенный фиксированный мазок;
  • Гистологическое исследование биоптата со специальными окрасками, такими как ШИК-реакция (PAS-метод) или окраска по Грокотту–Гомори.

Микроскопия позволяет идентифицировать дерматофиты по наличию следующих структур:

  • Гифы гриба (ветвящиеся нити), формирующие мицелий;
  • Артроспоры (фрагментированные споры);
  • Артроконидии (специализированные экзогенные споры);
  • Споры внутри волосяного стержня (тип поражения endothrix) или снаружи (тип ectothrix).

Элементы гриба иногда трудно обнаружить, особенно на фоне выраженного воспаления ткани или предшествующей терапии, поэтому отрицательный результат прямой микроскопии полностью не исключает грибковую инвазию.

Дрожжеподобные инфекции (в частности, кандидоз) микроскопически распознаются по наличию:

  • Дрожжевых клеток (бластоспор), часто находящихся в процессе почкования;
  • Псевдогиф, формирующих псевдомицелий.

Культуральное исследование (посев на грибы)

Посев позволяет идентифицировать конкретный вид возбудителя:

  • Для установления источника заражения (например, конкретный вид животного при зоофильной микроспории);
  • Для подбора наиболее эффективной таргетной противогрибковой терапии.

Рост культуры грибов на питательных средах может занимать от 1 до 4 недель при температуре инкубации 25–30 °C. Материал засевают на среду Сабуро с декстрозой, содержащую циклогексимид и левомицетин (хлорамфеникол). Если предполагается наличие плесневых грибов, циклогексимид исключают из состава среды, поскольку он подавляет их рост.

Отрицательный результат культурального исследования может быть обусловлен следующими факторами:

  • Заболевание имеет негрибковую этиологию;
  • Нарушена техника забора клинического материала;
  • Пациент применял системные или топические антимикотики до сдачи анализа;
  • Была нарушена транспортировка или имела место задержка доставки биоматериала в лабораторию;
  • Ошибки в ходе лабораторного культивирования;
  • Возбудитель относится к крайне медленнорастущим видам.

Выделение дрожжеподобных или плесневых грибов может свидетельствовать о сапрофитной колонизации, а не об истинной инфекции; это часто наблюдается на фоне фоновых дерматозов, например при псориазе.

Серологические тесты и анализы крови при глубоких и диссеминированных микозах

Анализы крови не имеют диагностической ценности при поверхностных дерматомикозах. Однако при подкожных и системных (глубоких) микозах применяются различные лабораторные тесты:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Молекулярно-генетическая диагностика методом ПЦР в режиме реального времени получила широкое распространение в последние годы. Метод обладает существенно более высокой чувствительностью по сравнению с культуральным исследованием и микроскопией.

Результаты ПЦР часто готовы в течение 24–48 часов, что обеспечивает быструю видовую идентификацию дерматофитов и недерматофитных микозов, способствуя выбору рациональной терапии и эпидемиологическому контролю.