Что такое иммуногистохимия?
Иммуногистохимия (ИГХ) считается высокотехнологичным методом патоморфологической диагностики. Как правило, ИГХ не применяется на начальном этапе, а назначается в случаях, когда данных рутинного гистологического исследования (окраски гематоксилином и эозином) недостаточно для верификации окончательного диагноза.
Метод ИГХ основан на связывании первичных антител со специфическим целевым белком (антигеном) ткани с последующей детекцией вторичными антителами, конъюгированными с меткой. При иммунопероксидазном окрашивании антитело связано с ферментом (пероксидазой), который катализирует реакцию с образованием нерастворимого коричневого преципитата в зоне локализации искомого белка. ИГХ также может выполняться с применением флуоресцентных меток (иммунофлуоресценция), при которой специфическое свечение оценивается с помощью люминесцентного микроскопа.
Характер распределения метки при ИГХ имеет решающее диагностическое значение; различают ядерный, мембранный или цитоплазматический типы окрашивания. ИГХ часто применяется в ситуациях, когда наличие или отсутствие определенных белковых маркеров служит основой диагноза, а также для дифференциальной диагностики сходных по рутинной гистологической картине патологических процессов.
Как выполняется иммуногистохимическое исследование?
Стандартный протокол подготовки срезов для иммуногистохимического исследования включает следующие этапы:
- Фиксация ткани (как правило, используется нейтральный забуференный формалин);
- Заливка ткани (в парафиновые блоки);
- Микротомия (получение ультратонких срезов ткани);
- Демаскировка антигенов (термическая обработка или гидролиз протеолитическими ферментами);
- Монтирование срезов на адгезивные стекла и дегидратация;
- Просветление препаратов и микроскопическая оценка результатов патоморфологом.
Каковы преимущества и недостатки иммуногистохимии?
К преимуществам метода ИГХ относятся:
- Возможность исследования как свежих или криоконсервированных образцов, так и стандартных архивных парафиновых блоков;
- Широкая доступность и отработанная стандартизация базовых протоколов;
- Сравнительно доступная стоимость реактивов;
- Короткие сроки выполнения исследования;
- Минимальный биологический риск для персонала, так как в работе не используются живые инфекционные патогены.
К недостаткам метода ИГХ относятся:
- Отсутствие единых международных стандартов для интерпретации ряда редких маркеров;
- Высокая стоимость оборудования для автоматизированного окрашивания;
- Сложность объективной количественной оценки экспрессии;
- Зависимость результата от человеческого фактора на преаналитическом и аналитическом этапах; ключевое значение имеет квалификация патологоанатома.
Примеры иммуногистохимических маркеров в дерматологии
В онкоморфологии применяются сотни иммуногистохимических маркеров для верификации различных опухолей. Ниже приведены основные антитела, наиболее часто используемые в дерматопатологии.
ИГХ-маркер |
Клиническое применение |
|
|---|---|---|
BCL2 |
Используется для дифференциальной диагностики базальноклеточного рака (диффузно положителен) и трихоэпителиомы (окрашивание преимущественно по периферии) |
|
CD3 |
Пан-Т-клеточный маркер; резко положителен при грибовидном микозе и других Т-клеточных лимфомах кожи |
|
CD4 |
Маркер Т-хелперов |
|
CD8 |
Маркер цитотоксических Т-лимфоцитов (Т-супрессоров) |
|
CD20 |
Пан-В-клеточный маркер; применяется в диагностике В-клеточных лимфом кожи |
|
CD30 |
Используется в диагностике лимфомы Ходжкина и анапластических крупноклеточных лимфом; окрашивание мембранное и перинуклеарное (в зоне аппарата Гольджи) |
|
CD31 |
Панэндотелиальный маркер; помогает идентифицировать опухоли сосудистого происхождения (гемангиомы, ангиосаркомы) |
|
CD34 |
Маркер сосудистого эндотелия и стволовых клеток; стабильно положителен при выбухающей дерматофибросаркоме (DFSP) и отрицателен при дерматофиброме |
|
CD56 |
Нейроэндокринный маркер и маркер NK-клеток; используется в диагностике неходжкинских лимфом, лейкозов кожи и мелкоклеточных нейроэндокринных карцином |
|
CD117 (c-kit) |
Маркер тирозинкиназного рецептора KIT; экспрессируется при мастоцитозе, стромальных опухолях ЖКТ и некоторых типах меланомы |
|
CDKN2A (p16) |
Маркер опухолевой супрессии; сверхэкспрессируется при ВПЧ-ассоциированных опухолях, актиническом кератозе, плоскоклеточном раке и помогает оценивать меланоцитарные дисплазии |
|
CK (панель цитокератинов) |
Цитокератины различной молекулярной массы применяются для разграничения доброкачественных и злокачественных опухолей придатков кожи |
|
CK20 |
Высокоспецифичен для карциномы Меркеля (перинуклеарное точечное окрашивание). Также экспрессируется при аденокарциномах ЖКТ |
|
Высокомолекулярные цитокератины (HMW-CK) |
Применяются для детекции протоковых карцином, плоскоклеточного рака и низкодифференцированных эпителиальных неоплазий |
|
Десмин (Desmin) |
Маркер гладкомышечной и поперечнополосатой мышечной дифференцировки (лейомиомы, лейомиосаркомы, рабдомиосаркомы) |
|
EMA |
Эпителиальный мембранный антиген; используется для верификации опухолей потовых желез, экстрамаммарной болезни Педжета и рака сальных желез |
|
Фактор XIIIa (Factor 13a) |
Маркер дермальных дендритных клеток; положителен при дерматофиброме (гистиоцитоме) и отрицателен при выбухающей дерматофибросаркоме |
|
HHV-8 |
Вирус герпеса человека 8-го типа; высокоспецифичный диагностический маркер всех форм саркомы Капоши |
|
HMB-45 |
Специфический меланоцитарный маркер (премеланосомы); экспрессируется при первичной и метастатической меланоме, но, как правило, отрицателен при десмопластической меланоме |
|
Melan-A (MART-1) |
Высокочувствительный маркер клеток меланоцитарного ряда (невусы, меланома) |
|
PD-L1 |
Лиганд белка запрограммированной клеточной гибели 1; предикторный биомаркер эффективности таргетной иммунотерапии ингибиторами контрольных точек |
|
S-100 |
Высокочувствительный маркер нейроэктодермальных опухолей: меланоцитарных неоплазий (невусы, меланома) и опухолей оболочек нервов (шванномы, нейрофибромы) |
|
SMA |
Альфа-гладкомышечный актин; маркер миофибробластов и гладкомышечных клеток |
|
SOX-10 |
Высокоспецифичный ядерный маркер меланоцитарных и шванновских опухолей; сохраняет экспрессию при веретеноклеточной и десмопластической меланоме |
|
Treponema pallidum |
Специфические антитела, позволяющие визуализировать бледную трепонему в биоптатах кожи при вторичном сифилисе |
|
Иммуногистохимические маркеры
BCL2
CD3
CD4
CD8
CD20
CD30
CD31
CD34
CD56
CD117
CDKN2A-P16
CK
CK20
CK7
Desmin
EMA
Factor 13a
HHV8
HMB45
Melan A
PDL1
S100
SMA
SOX10
Treponema pallidum